Javascript sedang dilumpuhkan dalam penyemak imbas anda.Apabila javascript dilumpuhkan, beberapa fungsi tapak web ini tidak akan berfungsi.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Jabatan Sains Philippe Deprez, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Sepanyol * Pengarang ini mempunyai beberapa pandangan tentang karya ini Equal latar belakang sumbangan: Asid hyaluronik (HA) ialah polisakarida semulajadi yang digunakan dalam penghasilan pengisi kulit untuk tujuan estetik.Memandangkan ia mempunyai separuh hayat beberapa hari dalam tisu manusia, pengisi kulit berasaskan HA diubah suai secara kimia untuk memanjangkan hayatnya di dalam badan.Pengubahsuaian yang paling biasa dalam pengisi berasaskan HA komersial ialah penggunaan 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) sebagai agen penghubung silang untuk memaut silang rantai HA.BDDE sisa atau tidak bertindak balas dianggap tidak toksik pada <2 bahagian per juta (ppm);oleh itu, baki BDDE dalam pengisi kulit akhir mesti dikira untuk memastikan keselamatan pesakit.Bahan dan kaedah: Kajian ini menerangkan pengesanan dan pencirian hasil sampingan tindak balas silang silang antara BDDE dan HA di bawah keadaan beralkali dengan menggabungkan kromatografi cecair dan spektrometri jisim (LC-MS).Keputusan: Selepas analisis yang berbeza, didapati bahawa keadaan alkali dan suhu tinggi yang digunakan untuk membasmi kuman hidrogel HA-BDDE menggalakkan pembentukan produk sampingan baharu ini, sebatian "seperti propilen glikol".Analisis LC-MS mengesahkan bahawa produk sampingan mempunyai jisim monoisotopik yang sama seperti BDDE, masa pengekalan (tR) yang berbeza dan mod penyerapan UV (λ=200 nm) yang berbeza.Tidak seperti BDDE, ia diperhatikan dalam analisis LC-MS bahawa di bawah keadaan pengukuran yang sama, produk sampingan ini mempunyai kadar pengesanan yang lebih tinggi pada 200 nm.Kesimpulan: Keputusan ini menunjukkan bahawa tiada epoksida dalam struktur sebatian baru ini.Perbincangan terbuka untuk menilai risiko produk sampingan baharu ini yang terdapat dalam penghasilan hidrogel HA-BDDE (HA dermal filler) untuk tujuan komersial.Kata kunci: asid hyaluronik, pengisi kulit HA, asid hyaluronik silang silang, BDDE, analisis LC-MS, produk sampingan BDDE.
Pengisi berasaskan asid hyaluronik (HA) adalah pengisi kulit yang paling biasa dan popular digunakan untuk tujuan kosmetik.1 Pengisi kulit ini adalah hidrogel, biasanya terdiri daripada >95% air dan 0.5-3% HA, yang memberikannya struktur seperti gel.2 HA ialah polisakarida dan komponen utama matriks ekstraselular vertebrata.Salah satu bahan.Ia terdiri daripada (1,4)-asid glukuronik-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) unit disakarida berulang yang disambungkan oleh ikatan glikosidik.Corak disakarida ini adalah sama dalam semua organisma.Berbanding dengan beberapa pengisi berasaskan protein (seperti kolagen), sifat ini menjadikan HA molekul yang sangat biokompatibel.Pengisi ini boleh mempamerkan kekhususan urutan asid amino yang mungkin diiktiraf oleh sistem imun pesakit.
Apabila digunakan sebagai pengisi kulit, had utama HA ialah perolehan pantasnya dalam tisu disebabkan kehadiran keluarga enzim tertentu yang dipanggil hyaluronidases.Setakat ini, beberapa pengubahsuaian kimia dalam struktur HA telah diterangkan untuk meningkatkan separuh hayat HA dalam tisu.3 Kebanyakan pengubahsuaian ini cuba mengurangkan akses hyaluronidase kepada polimer polisakarida dengan memaut silang rantai HA.Oleh itu, disebabkan oleh pembentukan jambatan dan ikatan kovalen antara molekul antara struktur HA dan agen penghubung silang, hidrogel HA berkait silang menghasilkan lebih banyak produk degradasi anti-enzim daripada HA semula jadi.4-6
Setakat ini, agen pemautan silang kimia yang digunakan untuk menghasilkan HA bersilang termasuk metakrilamida, 7 hidrazida, 8 karbodiimida, 9 divinil sulfon, 1,4-butanediol diglycidyl eter (BDDE) Dan poli(etilena glikol) diglycidyl eter.10 ,11 BDDE pada masa ini ialah ejen pemautan silang yang paling biasa digunakan.Walaupun jenis hidrogel ini telah terbukti selamat selama beberapa dekad, agen penghubung silang yang digunakan ialah reagen reaktif yang mungkin sitotoksik dan, dalam beberapa kes, mutagenik.12 Oleh itu, kandungan baki mereka dalam hidrogel akhir mestilah tinggi.BDDE dianggap selamat apabila kepekatan sisa kurang daripada 2 bahagian per juta (ppm).4
Terdapat beberapa kaedah untuk mengesan kepekatan BDDE sisa rendah, darjah silang silang dan kedudukan penggantian dalam hidrogel HA, seperti kromatografi gas, kromatografi pengecualian saiz ditambah dengan spektrometri jisim (MS), kaedah pengukuran pendarfluor resonans magnetik nuklear (NMR), dan Tatasusunan diod digandingkan kromatografi cecair prestasi tinggi (HPLC).13-17 Kajian ini menerangkan pengesanan dan pencirian produk sampingan dalam hidrogel HA berkait silang akhir yang dihasilkan oleh tindak balas BDDE dan HA di bawah keadaan beralkali.HPLC dan spektrometri jisim kromatografi cecair (analisis LC-MS).Memandangkan ketoksikan produk sampingan BDDE ini tidak diketahui, kami mengesyorkan bahawa kuantiti sisanya hendaklah ditentukan dengan cara yang serupa dengan kaedah yang biasanya dilakukan pada BDDE dalam produk akhir.
Garam natrium HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Jepun) yang diperolehi mempunyai berat molekul ~1,368,000 Da (kaedah Laurent) 18 dan kelikatan intrinsik 2.20 m3/kg.Untuk tindak balas silang silang, BDDE (≥95%) telah dibeli daripada Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Salin penimbal fosfat dengan pH 7.4 telah dibeli daripada Syarikat Sigma-Aldrich.Semua pelarut, asetonitril dan air yang digunakan dalam analisis LC-MS telah dibeli daripada kualiti gred HPLC.Asid format (98%) dibeli sebagai gred reagen.
Semua eksperimen dilakukan pada sistem UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) dan disambungkan kepada spektrometer jisim triple quadrupole API 3000 yang dilengkapi dengan sumber pengionan elektrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Sintesis hidrogel HA berkait silang telah dimulakan dengan menambahkan 198 mg BDDE kepada larutan natrium hyaluronat (NaHA) 10% (b/b) dengan kehadiran alkali 1% (natrium hidroksida, NaOH).Kepekatan BDDE akhir dalam campuran tindak balas ialah 9.9 mg/mL (0.049 mM).Kemudian, campuran tindak balas telah dicampur dengan teliti dan dihomogenkan dan dibiarkan pada suhu 45°C selama 4 jam.19 pH tindak balas dikekalkan pada ~12.
Selepas itu, campuran tindak balas dibasuh dengan air, dan hidrogel HA-BDDE akhir ditapis dan dicairkan dengan penimbal PBS untuk mencapai kepekatan HA 10 hingga 25 mg/mL, dan pH akhir 7.4.Untuk mensterilkan hidrogel HA berkait silang yang dihasilkan, semua hidrogel ini diautoklaf (120°C selama 20 minit).Hidrogel BDDE-HA yang telah dimurnikan disimpan pada suhu 4°C sehingga analisis.
Untuk menganalisis BDDE yang terdapat dalam produk HA berkait silang, sampel 240 mg ditimbang dan dimasukkan ke dalam lubang tengah (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; volum 0.5 mL) dan disentrifugasi pada 10,000 rpm pada suhu bilik 10 minit.Sebanyak 20 µL cecair tarik-turun telah dikumpul dan dianalisis.
Untuk menganalisis piawai BDDE (Sigma-Aldrich Co) dalam keadaan beralkali (1%, 0.1% dan 0.01% NaOH), jika syarat berikut dipenuhi, sampel cecair ialah 1:10, 1:100, atau sehingga 1:1,000,000 Jika perlu, gunakan air ternyahion MilliQ untuk analisis.
Bagi bahan permulaan yang digunakan dalam tindak balas silang silang (HA 2%, H2O, 1% NaOH, dan 0.049 mM BDDE), 1 mL setiap sampel yang disediakan daripada bahan ini dianalisis menggunakan keadaan analisis yang sama.
Untuk menentukan kekhususan puncak yang terdapat dalam peta ion, 10 µL larutan piawai 100 ppb BDDE (Sigma-Aldrich Co) telah ditambah kepada sampel 20 µL.Dalam kes ini, kepekatan akhir piawai dalam setiap sampel ialah 37 ppb.
Mula-mula, sediakan larutan stok BDDE dengan kepekatan 11,000 mg/L (11,000 ppm) dengan mencairkan 10 μL BDDE standard (Sigma-Aldrich Co) dengan 990 μL air MilliQ (ketumpatan 1.1 g/mL).Gunakan larutan ini untuk menyediakan larutan BDDE 110 µg/L (110 ppb) sebagai pencairan piawai perantaraan.Kemudian, gunakan pencair piawai perantaraan BDDE (110 ppb) untuk menyediakan lengkung piawai dengan mencairkan pencair perantaraan beberapa kali untuk mencapai kepekatan yang dikehendaki iaitu 75, 50, 25, 10, dan 1 ppb.Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1, didapati bahawa keluk piawai BDDE dari 1.1 hingga 110 ppb mempunyai kelinearan yang baik (R2>0.99).Keluk piawai diulang dalam empat eksperimen bebas.
Rajah 1 keluk penentukuran piawai BDDE yang diperolehi oleh analisis LC-MS, di mana korelasi yang baik diperhatikan (R2>0.99).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim.
Untuk mengenal pasti dan mengukur piawaian BDDE yang terdapat dalam HA bersilang dan piawaian BDDE dalam larutan asas, analisis LC-MS telah digunakan.
Pemisahan kromatografi telah dicapai pada lajur LUNA 2.5 µm C18(2)-HST (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) dan disimpan pada suhu bilik (25°C) semasa analisis.Fasa bergerak terdiri daripada asetonitril (pelarut A) dan air (pelarut B) yang mengandungi 0.1% asid formik.Fasa mudah alih dielusi oleh elusi kecerunan.Kecerunan adalah seperti berikut: 0 minit, 2% A;1 minit, 2% A;6 minit, 98% A;7 minit, 98% A;7.1 minit, 2% A;10 minit , 2% A. Masa berjalan ialah 10 minit dan isipadu suntikan ialah 20 µL.Masa pengekalan BDDE adalah kira-kira 3.48 minit (julat dari 3.43 hingga 4.14 minit berdasarkan eksperimen).Fasa mudah alih dipam pada kadar aliran 0.25 mL/min untuk analisis LC-MS.
Untuk analisis dan kuantifikasi BDDE oleh MS, sistem UPLC (Waters) digabungkan dengan spektrometer jisim kuadrupole tiga kali ganda API 3000 (AB SCIEX) yang dilengkapi dengan sumber pengionan semburan elektrik, dan analisis dilakukan dalam mod ion positif (ESI+).
Menurut analisis serpihan ion yang dilakukan pada BDDE, serpihan dengan keamatan tertinggi ditentukan sebagai serpihan yang sepadan dengan 129.1 Da (Rajah 6).Oleh itu, dalam mod pemantauan berbilang ion (MIM) untuk kuantifikasi, penukaran jisim (nisbah jisim-ke-cas [m/z]) BDDE ialah 203.3/129.1 Da.Ia juga menggunakan mod imbasan penuh (FS) dan mod imbasan ion produk (PIS) untuk analisis LC-MS.
Untuk mengesahkan kekhususan kaedah, sampel kosong (fasa mudah alih awal) telah dianalisis.Tiada isyarat dikesan dalam sampel kosong dengan penukaran jisim 203.3/129.1 Da.Mengenai kebolehulangan eksperimen, 10 suntikan standard 55 ppb (di tengah lengkung penentukuran) telah dianalisis, menghasilkan sisihan piawai sisa (RSD) <5% (data tidak ditunjukkan).
Kandungan BDDE sisa dikira dalam lapan hidrogel HA berkait silang BDDE autoklaf berbeza, sepadan dengan empat eksperimen bebas.Seperti yang diterangkan dalam bahagian "Bahan dan Kaedah", kuantifikasi dinilai oleh nilai purata keluk regresi pencairan piawai BDDE, yang sepadan dengan puncak unik yang dikesan pada peralihan jisim BDDE 203.3/129.1 Da, dengan pengekalan. masa 3.43 hingga 4.14 minit Tidak menunggu.Rajah 2 menunjukkan contoh kromatogram bagi piawai rujukan 10 ppb BDDE.Jadual 1 meringkaskan kandungan BDDE sisa lapan hidrogel berbeza.Julat nilai ialah 1 hingga 2.46 ppb.Oleh itu, kepekatan BDDE sisa dalam sampel boleh diterima untuk kegunaan manusia (<2 ppm).
Rajah 2 Kromatogram ion piawai rujukan 10 ppb BDDE (Sigma-Aldrich Co), peralihan MS (m/z) yang diperolehi oleh analisis LC-MS sebanyak 203.30/129.10 Da (dalam mod MRM positif).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas pelbagai;MS, jisim;m/z, nisbah jisim kepada cas.
Nota: Sampel 1-8 ialah hidrogel HA berkait silang BDDE yang diautoklaf.Jumlah baki BDDE dalam hidrogel dan puncak masa pengekalan BDDE juga dilaporkan.Akhir sekali, kewujudan puncak baharu dengan masa pengekalan yang berbeza juga dilaporkan.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HA, asid hyaluronik;MRM, pemantauan tindak balas pelbagai;tR, masa pengekalan;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;RRT, masa pengekalan relatif.
Yang menghairankan, analisis kromatogram ion LC-MS menunjukkan bahawa berdasarkan semua sampel hidrogel HA berkait silang berautoklaf yang dianalisis, terdapat puncak tambahan pada masa pengekalan yang lebih pendek iaitu 2.73 hingga 3.29 minit.Sebagai contoh, Rajah 3 menunjukkan kromatogram ion bagi sampel HA berpaut silang, di mana puncak tambahan muncul pada masa pengekalan berbeza kira-kira 2.71 minit.Masa pengekalan relatif (RRT) yang diperhatikan antara puncak yang baru diperhatikan dan puncak dari BDDE didapati 0.79 (Jadual 1).Oleh kerana kita tahu bahawa puncak yang baru diperhatikan kurang dikekalkan dalam lajur C18 yang digunakan dalam analisis LC-MS, puncak baru mungkin sepadan dengan sebatian yang lebih polar daripada BDDE.
Rajah 3 Kromatogram ion sampel hidrogel HA berkait silang yang diperolehi oleh LC-MS (penukaran jisim MRM 203.3/129.0 Da).
Singkatan: HA, asid hyaluronik;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas pelbagai;RRT, masa pengekalan relatif;tR, masa pengekalan.
Untuk menolak kemungkinan puncak baru yang diperhatikan mungkin bahan cemar yang asalnya terdapat dalam bahan mentah yang digunakan, bahan mentah ini juga dianalisis menggunakan kaedah analisis LC-MS yang sama.Bahan permulaan yang dianalisis termasuk air, 2% NaHA dalam air, 1% NaOH dalam air, dan BDDE pada kepekatan yang sama digunakan dalam tindak balas silang silang.Kromatogram ion bahan permulaan yang digunakan tidak menunjukkan sebarang sebatian atau puncak, dan masa pengekalannya sepadan dengan puncak baharu yang diperhatikan.Fakta ini menolak idea bahawa bukan sahaja bahan permulaan mungkin mengandungi sebarang sebatian atau bahan yang boleh mengganggu prosedur analisis, tetapi tiada tanda kemungkinan berlaku pencemaran silang dengan produk makmal lain.Nilai kepekatan yang diperoleh selepas analisis LC-MS BDDE dan puncak baru ditunjukkan dalam Jadual 2 (sampel 1-4) dan kromatogram ion dalam Rajah 4.
Nota: Sampel 1-4 sepadan dengan bahan mentah yang digunakan untuk menghasilkan hidrogel HA berkait silang BDDE yang diautoklaf.Sampel ini tidak diautoklaf.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HA, asid hyaluronik;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas berganda.
Rajah 4 sepadan dengan kromatogram LC-MS bagi sampel bahan mentah yang digunakan dalam tindak balas silang silang HA dan BDDE.
Nota: Semua ini diukur pada kepekatan dan nisbah yang sama yang digunakan untuk menjalankan tindak balas silang silang.Nombor untuk bahan mentah yang dianalisis oleh kromatogram sepadan dengan: (1) air, (2) larutan akueus 2% HA, (3) larutan akueus NaOH 1%.Analisis LC-MS dilakukan untuk penukaran jisim 203.30/129.10 Da (dalam mod MRM positif).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HA, asid hyaluronik;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas berganda.
Keadaan yang membawa kepada pembentukan puncak baru telah dikaji.Untuk mengkaji bagaimana keadaan tindak balas yang digunakan untuk menghasilkan hidrogel HA berkait silang mempengaruhi kereaktifan agen penghubung silang BDDE, yang membawa kepada pembentukan puncak baru (kemungkinan hasil sampingan), pengukuran yang berbeza telah dilakukan.Dalam penentuan ini, kami mengkaji dan menganalisis penghubung silang BDDE terakhir, yang dirawat dengan kepekatan NaOH yang berbeza (0%, 1%, 0.1%, dan 0.01%) dalam medium akueus, diikuti dengan atau tanpa autoklaf.Prosedur bakteria untuk mensimulasikan keadaan yang sama adalah sama dengan kaedah yang digunakan untuk menghasilkan hidrogel HA berkait silang.Seperti yang diterangkan dalam bahagian "Bahan dan Kaedah", peralihan jisim sampel dianalisis oleh LC-MS kepada 203.30/129.10 Da.BDDE dan kepekatan puncak baru dikira, dan keputusan ditunjukkan dalam Jadual 3. Tiada puncak baru dikesan dalam sampel yang tidak diautoklaf, tanpa mengira kehadiran NaOH dalam larutan (sampel 1-4, Jadual 3).Bagi sampel yang diautoklaf, puncak baru hanya dikesan dengan kehadiran NaOH dalam larutan, dan pembentukan puncak nampaknya bergantung kepada kepekatan NaOH dalam larutan (sampel 5-8, Jadual 3) (RRT = 0.79).Rajah 5 menunjukkan contoh kromatogram ion, menunjukkan dua sampel diautoklaf dalam ada atau tiada NAOH.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas berganda.
Nota: Kromatogram atas: Sampel telah dirawat dengan larutan akueus 0.1% NaOH dan diautoklaf (120°C selama 20 minit).Kromatogram bawah: Sampel tidak dirawat dengan NaOH, tetapi diautoklaf di bawah keadaan yang sama.Penukaran jisim 203.30/129.10 Da (dalam mod MRM positif) telah dianalisis oleh LC-MS.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas berganda.
Dalam semua sampel yang diautoklaf, dengan atau tanpa NaOH, kepekatan BDDE telah dikurangkan dengan banyaknya (sehingga 16.6 kali) (sampel 5-8, Jadual 2).Penurunan kepekatan BDDE mungkin disebabkan oleh fakta bahawa pada suhu tinggi, air boleh bertindak sebagai bes (nukleofil) untuk membuka cincin epoksida BDDE untuk membentuk sebatian 1,2-diol.Kualiti monoisotopik sebatian ini berbeza daripada BDDE dan oleh itu tidak akan terjejas.LC-MS mengesan anjakan jisim 203.30/129.10 Da.
Akhir sekali, eksperimen ini menunjukkan bahawa penjanaan puncak baharu bergantung kepada kehadiran BDDE, NAOH, dan proses autoklaf, tetapi tiada kaitan dengan HA.
Puncak baru yang ditemui pada masa pengekalan kira-kira 2.71 minit kemudiannya dicirikan oleh LC-MS.Untuk tujuan ini, BDDE (9.9 mg/mL) diinkubasi dalam larutan akueus 1% NaOH dan diautoklaf.Dalam Jadual 4, ciri-ciri puncak baharu dibandingkan dengan puncak rujukan BDDE yang diketahui (masa pengekalan kira-kira 3.47 minit).Berdasarkan analisis pemecahan ion kedua-dua puncak, dapat disimpulkan bahawa puncak dengan masa pengekalan 2.72 minit menunjukkan serpihan yang sama dengan puncak BDDE, tetapi dengan intensiti yang berbeza (Rajah 6).Untuk puncak yang sepadan dengan masa pengekalan (PIS) 2.72 minit, puncak yang lebih sengit diperhatikan selepas pemecahan pada jisim 147 Da.Pada kepekatan BDDE (9.9 mg/mL) yang digunakan dalam penentuan ini, mod penyerapan yang berbeza (UV, λ=200 nm) dalam spektrum ultraungu juga diperhatikan selepas pemisahan kromatografi (Rajah 7).Puncak dengan masa pengekalan 2.71 minit masih boleh dilihat pada 200 nm, manakala puncak BDDE tidak boleh diperhatikan dalam kromatogram di bawah keadaan yang sama.
Jadual 4 Keputusan pencirian bagi puncak baharu dengan masa pengekalan kira-kira 2.71 minit dan puncak BDDE dengan masa pengekalan 3.47 minit
Nota: Untuk mendapatkan keputusan ini, analisis LC-MS dan HPLC (MRM dan PIS) telah dilakukan pada kedua-dua puncak.Untuk analisis HPLC, pengesanan UV dengan panjang gelombang 200 nm digunakan.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HPLC, kromatografi cecair prestasi tinggi;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas pelbagai;m/z, nisbah jisim kepada cas;PIS, pengimbasan Ion produk;cahaya ultraviolet, cahaya ultraviolet.
Nota: Serpihan jisim diperoleh dengan analisis LC-MS (PIS).Kromatogram atas: spektrum jisim serpihan sampel standard BDDE.Kromatogram bawah: Spektrum jisim puncak baharu yang dikesan (RRT yang dikaitkan dengan puncak BDDE ialah 0.79).BDDE diproses dalam larutan NaOH 1% dan diautoklaf.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cecair dan spektrometri jisim;MRM, pemantauan tindak balas pelbagai;PIS, imbasan ion produk;RRT, masa pengekalan relatif.
Rajah 7 Kromatogram ion bagi ion prekursor 203.30 Da, dan (A) puncak baharu dengan masa pengekalan 2.71 minit dan (B) pengesanan UV bagi puncak standard rujukan BDDE pada 3.46 minit pada 200 nm.
Dalam semua hidrogel HA berkait silang yang dihasilkan, diperhatikan bahawa kepekatan BDDE sisa selepas kuantifikasi LC-MS adalah <2 ppm, tetapi puncak baru yang tidak diketahui muncul dalam analisis.Puncak baharu ini tidak sepadan dengan produk standard BDDE.Produk standard BDDE juga telah menjalani analisis penukaran kualiti yang sama (penukaran MRM 203.30/129.10 Da) dalam mod MRM positif.Secara amnya, kaedah analisis lain seperti kromatografi digunakan sebagai ujian had untuk mengesan BDDE dalam hidrogel, tetapi had pengesanan maksimum (LOD) adalah lebih rendah sedikit daripada 2 ppm.Sebaliknya, setakat ini, NMR dan MS telah digunakan untuk mencirikan tahap pemautan silang dan/atau pengubahsuaian HA dalam serpihan unit gula produk HA terpaut silang.Tujuan teknik ini tidak pernah untuk mengukur pengesanan BDDE sisa pada kepekatan rendah seperti yang kami huraikan dalam artikel ini (LOD kaedah LC-MS kami = 10 ppb).
Masa siaran: Sep-01-2021